Afdichtings- en verontreinigingsproblemen in multiwell celkweekplaten

Laden en hanteren van celkweekplaten met meerdere putjes:

De celkweekplaat volgt ook het principe van strikte asepsis bij het uitvoeren van celbewerkingen. Alle operaties moeten gestandaardiseerd en wetenschappelijk zijn en zullen geen extra impact hebben op de celgroei. Het meest voorkomende probleem is hoe u de uniformiteit van de cellen kunt waarborgen na het toevoegen van het monster en het minimaliseren van de impact van het veranderen van het medium op de groeitoestand van de cellen.

vragen:
De deksels van 96 en 24-putjes kweekplaten of petrischalen zijn erg los, wat handig is voor ventilatie, maar zullen bacteriën, schimmel en andere verontreinigende stoffen ook binnen glijden?

antwoord:
Het deksel is erg los, dat tot de semi-open cultuur behoort, en het doel hiervan is te ventileren (het is in feite om de CO2 buiten de cultuurschotel volledig te laten uitwisselen met de kweekgerecht en de pH-waarde van de cultuur te behouden medium).
Alles heeft voor- en nadelen, wat natuurlijk de mogelijkheid van vervuiling vergroot. Bovendien zorgt dit ervoor dat de vloeistof in het gerecht verdampt, wat opmerkelijk is voor precieze dosering van medicijnen. Daarom zijn de volgende twee maatregelen nodig: a. De lucht in de incubator moet schoon zijn (normaal ultraviolet licht, alcoholschrobben en de incubator moet zo min mogelijk worden geopend en gesloten) b. De vochtigheid in de incubator moet altijd op 100% worden bewaard (de gootsteen met steriel gedestilleerd water dat in de incubator wordt geplaatst).
Net als een petrischaal, is het ook een container met een ondersteboven deksel, en het zal niet worden vervuild. Vooral vanwege de negatieve druk van de luchtstroom gegenereerd door de "L" rand van het deksel, zijn er micro -organismen bevestigd aan het stof en het stof dat door de luchtstroom wordt gedragen, kan niet door de rand van het deksel gaan dat negatieve druk genereert. Het ventilatie -effect is alleen door de diffusie van lucht, en er wordt geen luchtstroom gegenereerd, dus het zal alleen ademen en niet doordringen in bacteriën.

vragen:
Met behulp van een plaat van 24 putjes zijn er bewerkingen in sommige putten (in de ultra-schone bank), en er zijn cellen die in andere putten worden gekweekt. Ik ben bang dat dit besmetting zal veroorzaken. Ik weet niet waar ik op moet letten?

antwoord:
Als de bewerking is gestandaardiseerd in de ultra-schone bank, zou deze OK moeten zijn. Ik denk dat je volledig gebruik kunt maken van de dekking van de cultuurplaat, probeer alleen de gaten bloot te leggen die moeten worden gebruikt en de andere gaten met deksels bedekken.
Overweeg volledig voor gebruik en maak volledig gebruik van alle gaten; Als u maar een paar gaten hoeft te gebruiken, kunt u slechts één kant gebruiken en de rest bedekken met een hoes. Ik ben gewend om eerst het rechtergat te gebruiken (het is handig om monsters aan de rechterhand toe te voegen).

Gebruik bij het werken een paar glazen dia's om één kant van het bord op te heffen, open de dekking niet volledig, meestal geen probleem.
Ongelijke celdistributie en oplossingen

vragen:
Cellen worden geïnoculeerd op de kweekplaat en de cellen verzamelen zich altijd in het perifere deel, hoe kunnen ze ermee omgaan?

antwoord:
Mag ik vragen hoe uw cellen gemengd zijn? Is het pipetterend of schudt het de kweekplaat? Als het de laatste is, en als het in een cirkel wordt geschud, is het zeer waarschijnlijk dat de cellen door de centrifugale kracht naar het perifere deel worden gegooid, wat resulteert in minder cellen in het midden. Meer dan vier weken!
Hier is een goede manier: voordat u de zaadplaat cultiveert, plaats de kweekplaat een paar uur verzadiging in de incubator en haal deze eruit. De kracht moet licht zijn bij het planten van de cellen. Door langzaam toe te voegen, kunnen de celsuspensie in de putten van de plaat stromen en de gekweekte cellen groeien in principe gelijkmatig. Vergeet niet om nooit te schudden met een shaker, of je cellen zullen samen klonten zoals je zei.
Hoe kleiner de gatdiameter van de kweekplaat, hoe duidelijker dit fenomeen is. Dit fenomeen is onvermijdelijk voor platen van 24 en 96 putjes, omdat de vloeistof zich hecht aan de wand zodat de kweekoplossing in de put geen vloeibaar niveau vormt, maar de periferie is hoog, net als een concave spiegel. Wanneer u deze twee soorten openingplaten gebruikt, is het echter niet mogelijk om voldoende hoeveelheid kweekoplossing toe te voegen vanwege de behoefte aan extra interventie, zodat de cellen "edge -verzameling" zullen verschijnen samen met de kweekoplossing. Het hangt af van welke indicatoren u moet waarnemen. Als het MTT is, zal immunohistochemie de resultaten beïnvloeden als gevolg van cellagen.
Let bij het verteren van cellen, aandacht aan het gelijkmatig pipetten om celklontjes te voorkomen, en de hoeveelheid kweekoplossing in de put moet voldoende zijn. Voeg over het algemeen voldoende kweekoplossing toe bij het inoculeren en verander de oplossing eenmaal bij het toevoegen van interventie. De hoeveelheid cultuuroplossing die aan de interventieoplossing is toegevoegd, is gelijk aan de hoeveelheid kweekoplossing op het moment van inoculatie, in dit geval zal het fenomeen van "Edge Set" worden verbeterd, dus je kunt het net zo goed proberen.

vragen:
Wat ik deed was het experiment met plaque -vorming. Het is het beste om de cellen in een uniforme laag te verspreiden. De meeste gaten zijn prima wanneer het virus wordt geïnoculeerd, en sommige zijn niet uniform. Er zijn grote verschillen in de celgroep. Ik zou je willen vragen welke methode je gebruikt bij het toevoegen van cellen?

antwoord:
Het is van cruciaal belang om de cellen na de spijsvertering in een suspensie met één cellen te pipetten! Zorg ervoor dat het aantal cellen in elk putje consistent is bij het splitsen van de plaat!
Natuurlijk zijn er ook verwerkingsfactoren. De parallellisme tussen de putten is ook erg belangrijk. Bij het toevoegen van medicijnen meng het medicijn bijvoorbeeld na verdunning om ervoor te zorgen dat de concentratie van elke put consistent is!
Bovendien moeten bij het toevoegen van cellen en geneesmiddelen de testgroep en de controlegroep op hun beurt worden toegevoegd om het verschil in celdichtheid en geneesmiddelconcentratie veroorzaakt door de volgorde van het toevoegen van monsters te voorkomen!

vragen:
Het blazen is al uniform, maar de planking, 6 gaten en 24 gaten zijn altijd enigszins ongelijk en een beetje geconcentreerd in het midden. Bovendien is het duidelijk dat het tellen wordt gedaan, en na een dag of twee is de dichtheid van elk gat anders, wat de detectie zal beïnvloeden. Is er een goede manier?

antwoord:
Als u een Pasteur -pipet gebruikt, zuigt u niet elke keer te veel, omdat de cellen in de pipet automatisch zinken, vaak is het aantal cellen in de eerste paar gaten groot en is de celsuspensie vaak uniform en de vloeistof Volg de S-vormige route.
Als u een pipet gebruikt, moeten de tips worden verwerkt en verwijderd om de cellen te voorkomen, zodat elke keer dat de vloeistof wordt genomen overeenkomt met een put. Het is nauwkeuriger om één-op-één gat met tip toe te voegen. Maar let ook op het mengen van de ophanging.

Om een ​​parallelle groep op te zetten, moet N groot genoeg zijn (u kunt deze berekenen).

Schud niet na het plateren, omdat schudden cellen zullen aggregeren naar het midden. Het is het beste om één keer te plank.

Poreuze celkweekplaat Yongyue Medical heeft kwaliteitscontrole altijd als de levensduur van de onderneming beschouwd en de voortdurende verbetering van het concurrentievermogen van het bedrijfsactiviteiten voortgezet. Het bedrijf houdt zich altijd aan de ondernemingsgeest om wetten en voorschriften te gehoorzamen, strikt te zijn met zelfdiscipline, soepel te zijn en durf te durfden te nemen als de standaard in bedrijf, onderhouden en uitbreiden van de markt met uitstekende kwaliteit en uitstekende service, en het ontmoeten behoeften van klanten in de grootste mate. . Win-win met klanten is ons ontwikkelingsdoel. Yongyue Medical! Uw vertrouwde partner. We zijn bereid om oprecht met u samen te werken om een ​​betere toekomst te creëren.