Gedetailleerde uitleg van reagensvolatilisatie in PCR -experimenten

Gedetailleerde uitleg van reagensvolatilisatie in PCR -experimenten.

In het PCR -experiment, na het toevoegen van het reactiesysteem, bedekken we het deksel zorgvuldig en bevestigen we herhaaldelijk dat het deksel is gesloten om reagenservluchtilisatie te voorkomen. Maar soms hebben we ook twijfels: we hebben bevestigd dat het deksel strak gesloten is, maar nadat het experiment is voltooid, zal het reagens nog steeds verdampen. wat is de reden?

In feite is reagensvolatilisatie een van de meest voorkomende problemen bij PCR -experimenten, en er zijn veel factoren die de reagensverdeling beïnvloeden.

Verdamping verwijst naar dat tijdens het PCR -experiment, de reactieoplossing verdampt bij hoge temperatuur en condenseert vervolgens op de fleswand of bovenklep om watermist of waterdruppeltjes te vormen, of stroomt direct over van de luchtspleet van de flesdop of film, als gevolg in een verandering in de concentratie van de reactieoplossing. Veranderingen, de hoeveelheid reactieoplossing nam af en sommigen verdampten zelfs tot droog, wat resulteerde in ongeldige experimenten.

1. Hot dekseldruk, temperatuur

In PCR -experimenten verwarmen we meestal het deksel om condensatie van reagensdamp te voorkomen. De temperatuur van het verwarmde deksel is meestal hoger dan die van de reactieoplossing om condensatie van dampen te voorkomen.

Thermische cyclerverwarmingsdeksels kunnen ruwweg worden verdeeld in de volgende vier typen: niet-verstelbare verwarmingsdeksels, verstelbare verwarmingsdeksels, adaptieve verwarmingsdeksels en automatische verwarmingsdeksels. Verstelbaar verwarmde deksel heeft vingerdichte compressie. Als het niet goed is vastgedraaid, zullen reagentia verdampen. Randverdamping kan worden geminimaliseerd door de druk op het verwarmde deksel te vergroten. Soms kan het overduidelijk in de buis knijpen en de knop draaien. Onder normale omstandigheden kan de elektrische slimme verwarmingsdekking automatisch verbruiksartikelen van verschillende hoogten detecteren, verbruiksgoederen automatisch comprimeren en de druk is uniform en constant, waardoor reagensverdamping en handmatige fouten worden verminderd en de experimentele nauwkeurigheid en herhaalbaarheid verbeteren.

2. Vervorming van verbruiksgoederen

Voor stoomlekken denken de meeste mensen dat de druk van het hete deksel niet voldoende is. De druk van het hete deksel is erg belangrijk, maar dat is slechts één aspect. In feite zijn verbruiksartikelen ook erg belangrijk.

PCR -openingplaten zijn meestal gemaakt van plastic materialen, die sterk uitzetten en vervormen nadat ze zijn verwarmd. De thermische expansiesnelheid van de PCR -metaalbasis die wordt gebruikt om de PCR -openingplaat te plaatsen is extreem laag en de PCR -openingsplaat kan na thermische expansie niet normaal uitzetten langs het vlak. De uitpuilende toestand zorgt ervoor dat de bovenste warmteafdekking niet in staat is om het oppervlak van de PCR -openingsplaat volledig in te stellen, wat resulteert in ongelijke temperatuur en druk, waardoor reagenverdamping aan de rand van de PCR -openingsplaat wordt veroorzaakt en het PCR -detectieeffect beïnvloedt.

3. Verbruiksartikelen zijn niet strak afgesloten

De strakheid van het thermische deksel en de verbruiksartikelen betekent niet dat de PCR -buisdop strak gesloten is en de kwaliteit van de PCR -putplaat ongelijk is. Bruikbare kwaliteit van hoge kwaliteit, het oppervlak van het mondstuk en het deksel zijn glad en de afdichting achter de doosafdekking is goed en het is niet gemakkelijk te lekken. Inferieure verbruiksartikelen hebben ongelijke tuiten en radiale lijnen, die gemakkelijk lekkage kunnen veroorzaken of zelfs kunnen uitdrogen.

In PCR-experimenten probeer daarom van hoge kwaliteit en geschikte verbruiksartikelen te kiezen. Tegelijkertijd kan het reactiesysteem worden uitgebreid om de invloed van systeemverdamping op de reactie te minimaliseren.